绵羊MIR-148b和MIR-320对毛囊发育调控研究

【摘要】MicroRNAs(miRNAs)是一类能够对基因进行广泛调节的非编码微小RNA,存在于真核生物体内。已有研究表明它们能够参与肿瘤形成、心脏发育、脂肪代谢、神经系统发育和细胞的增殖分化等过程。此外有证据表明miRNA会影响毛囊的发育和生长周期。本课题组前期利用Solexa测序检测了藏绵羊毛囊发育不同时期(休止期、生长期和衰退期)miRNAs的表达情况,试图筛选出对毛囊发育过程有重要作用的miRNAs。测序结果表明毛囊从休止期到生长期的发育过程中,miR-148b和miR-320属于上调表达倍数最高的一类miRNAs。为了进一步验证上述miRNA在毛囊发育过程中的具体作用及作用机制,本实验以人毛乳头细胞和人毛母质细胞为材料,在体外研究了miR-148b和miR-320对其增殖情况的影响,推断了miR-148b和miR-320在毛囊发育过程中的作用以及它们发挥作用可能涉及的信号通路。获得结果如下：(1)Q-PCR的结果说明毛囊生长期miR-148b和miR-320的表达水平显著高于休止期的表达情况,这与前期的测序结果相符。(2)miR-148b可促进人毛乳头细胞和人毛母质细胞的增殖,miR-320对人毛乳头细胞和人毛母质细胞的增殖有抑制作用。用miRNAminicis转染人毛乳头细胞和人毛母质细胞后发现,超表达miR-148b后利用Edu检测的增殖细胞比例显著高于.对照组的(P<0.05)；而超表达miR-320后Edu检测的增殖细胞比例显著低于对照组的(P<0.05)。另用xCELLigence系统实时监控系统检测证实超表达miR-148b后人毛乳头细胞的增殖速度显著高于对照组。(3)miR-148b能显著提高Wnt信号通路的活性。TOPFlash/FOPFlash荧光素酶报告基因检测结果表明miR-148b能显著提高TOPFlash报告基因的荧光信号强度(P<0.05)。(4)超表达miR-148b能提高Wnt信号通路下游转录因子的表达水平,而miR-320会降低它们的表达水平。在人毛乳头细胞中超表达miR-148b和miR-320后检测β-catenin、cycD、c-jun和PPARD的mRNA的表达水平,结果表明相比于对照组,转染miR-148bminics能提高上述基因的表达情况,而转染miR-320minics则会降低上述基因的表达情况。(5)miR-148b可能会靶作用于SMAD2、CAMK2A、NFAT5和Wnt10b来发挥对Wnt信号通路的调控作用。我们利用Targetscan对miR-148b的靶基因进行了预测和筛选,选取NFAT5、SMAD2、CAMK2A、PRICKL2、Wnt1和Wnt10B作为其候选靶基因；经过双荧光素酶报告基因载体系统验证,证实了miR-148b与SMAD2、CAMK2A、NFAT5和Wnt10b3’UTR的特异结合作用。
【作者】李勤群；
【导师】余梅；
【作者基本信息】华中农业大学，动物遗传育种与繁殖，2014，硕士
【关键词】miR-148b；miR-320；绵羊；毛囊；人毛乳头细胞；人毛母质细胞；

【参考文献】
[1]王方舟.基于序列信号特征SCM法的基因识别的MATLAB实现[D].山东大学,应用统计（专业学位）,2013,硕士.
[2]吕九一.基于无线传感器网络的微灌监控系统研究[D].沈阳建筑大学,检测技术与自动化装置,2012,硕士.
[3]汪颖,张三元,张克俊,孙守迁.产品材料质感偏好意象进化认知算法与系统[J].计算机集成制造系统,2014,04:762-770.
[4]李莉.Presenilins条件性双基因敲除小鼠超微结构的增龄性变化及运动能力的研究[D].华东师范大学,生物医学,2013,硕士.
[5]杜娟.突发公共卫生事件报道的框架分析[D].西南大学,传播学,2014,硕士.
[6]王大为.桥面质量无损检测关键技术应用研究[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2013,硕士.
[7]吴琼.碳纳米管表面处理及其改性PI杂化薄膜力学性能分析[D].哈尔滨理工大学,2014.
[8]王乐.慢速生长细菌原位代谢实现污泥减量化研究[D].东北师范大学,环境工程,2012,硕士.
[9]李瑾茜.天津滨海新区城市公共空间设计与管理制度的研究[D].天津大学,风景园林,2013,硕士.
[10]李雷.紫外线吸收剂CGL-479与头孢他啶侧链酸活性硫酯的合成研究[D].天津大学,化学工程,2013,硕士.
[11]马骁.故意伤害胎儿行为入罪问题研究[D].贵州民族大学,刑法学,2014,硕士.
[12]李俊辉.业主方建设项目施工阶段组织界面管理研究[D].青岛理工大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[13]魏衡江.Helwan埃及钢铁公司（EISCO）的现代化工程[J].冶金自动化,1996,04:12.
[14]胡丽君.马来西亚的新经济政策与族群关系演变（1957-1990）[D].华中师范大学,世界史,2014,硕士.
[15]曹杰.认知学徒制在小学信息技术教学中的应用研究[D].河北师范大学,现代教育技术,2012,硕士.
[16]李丽华.基于C/S和B/S混合结构的放射源动态管理系统的研究与设计[D].南华大学,核技术及应用,2012,硕士.
[17]王月礼.灰土改良黄土状硫酸盐渍土强度特性的研究[D].兰州理工大学,岩土工程,2014,硕士.
[18]李林桓.CD移动家庭产品业务营销策略研究[D].电子科技大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[19]何小娟.前列地尔对体外培养类缺血再灌注模型视网膜神经节细胞的影响[D].广西医科大学,眼科学,2013,硕士.
[20]赵军.研究生教育思想范畴论[D].西安电子科技大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[21]肖吉军.住宅产业现代化技术发展分析研究[D].西安建筑科技大学,2004.
[22]张莫.GPS/BD-2卫星定位算法设计与实现[D].河北科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[23]张建勋,唐洪英,龚箭.可重用集成设计单元模型研究[J].计算机工程与应用,2002,03:23-26.
[24]韩国政,徐丙垠,索南加乐,陈亚洲.配电终端自动发现技术的实现[J].电力系统自动化,2012,18:82-85.
[25]胡长江.基于FPGA的超声波液体流量计的设计[D].哈尔滨理工大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[26]赵翠.基于压缩感知的语音信号压缩[D].浙江工业大学,2013.
[27]王彪.2010年诺贝尔物理学奖简介及其对中学物理教学的启示[J].物理教学探讨,2011,02:29-31.
[28]朱伟成.表面增强红外光谱材料的制备和研究[D].南京师范大学,分析化学,2012,硕士.
[29]高杉.农业政策性银行在新农村建设中的作用探析[D].吉林大学,公共管理,2014,硕士.
[30]金胜蓝.Narcotrend指导下右美托咪定用于胸科手术患者行非清醒气管拔管可行性研究[D].华中科技大学,麻醉学,2013,硕士.
[31]窦维.董事会特征与公司绩效关系研究[D].西南大学,会计学,2013,硕士.
[32]张黎明.基于全寿命周期成本管理的变电设备维修决策研究[D].浙江工业大学,2009.
[33]闫云飞.论继父母子女间的权利义务在实务中的适用[D].大连海事大学,法律,2013,硕士.
[34]余志丹.从“我”到“我们”[D].广东外语外贸大学,英语语言文学,2013,硕士.
[35]王坤.大学生体育锻炼习惯概念模型、测评方法和教育干预的研究[D].华东师范大学,2011.
[36]孙芳芳.乙酰苯胺和2-氯苯磺酰胺诱导启动子IN2-2在植物中的表达研究[D].西南大学,蔬菜学,2014,硕士.
[37]王娟.生姜泻心汤对伊立替康化疗后大鼠肠粘膜损伤修复的影响[D].北京中医药大学,中西医结合临床,2014,硕士.
[38]步乐乐.曲线梁桥离心力效应研究[D].华中科技大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[39]张艳.福柯眼中的“圆形监狱”[D].湘潭大学,法律,2003,硕士.
[40]胡振雄.凡纳滨对虾—金钱鱼—蕹菜综合养殖模式的初步探讨[D].上海海洋大学,水产养殖,2013,硕士.
[41]赵新娟.基于计算经济的动态自适应交通网格资源管理模型研究[D].大连理工大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[42]曹晓清.WSAN激励节点移动定位路径规划研究[D].西南交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[43]侯卫真.柑橘黄龙病Serralysin蛋白的表达纯化及两种重要病原的分子检测[D].华中农业大学,果树学,2014,硕士.
[44]周典富.《宋书》异文研究[D].复旦大学,汉语言文字学,2013,博士.
[45]杨振强,朴营国,程树康.二级倒立摆的状态变量合成模糊神经网络控制[J].控制与决策,2002,01:123-125+128.
[46]黄静亚.基于地方依恋理论的少数民族社区旅游社会文化影响研究[D].西安外国语大学,人文地理学,2013,硕士.
[47]于勇.电流直接控制的三相静止同步补偿器的研究[D].哈尔滨理工大学,电力电子与电力传动,2012,硕士.
[48]何榕健.基于版本控制与锁定策略结合的土地业务协同管理技术研究[D].浙江大学,地图学与地理信息系统,2013,硕士.
[49]姚国军.阀上实验室与安培法联用技术的研究[D].扬州大学,分析化学,2011,硕士.
[50]李茁新,陆强.中国管理学案例研究:综述与评估[J].科研管理,2010,05:35-44+101.